Определение содержание органического белка методом Кьельдаля
Метод был разработан в 1883 году датским химиком Иоганном Кьельдалем в лаборатории Carlsberg. Он позволяет количественно определять содержание органического белка в пробе. Основан на разрушении пептидной связи с последующим высвобождением молекулы азота и его количественного анализа с титрования.
Классический метод Кьельдаля предусматривает три этапа: разложение, дистилляцию и титрование. После титрования использованное количество титранта соответствует концентрации азота, который был в образце. Перерасчет на белок происходит с коэффициента перерасчета F (6,25 = 0,16 г азота на 1 г белка). Полное время анализа одного составляет образца составляет около 2 часов. Метод достаточно чувствительный, предел определения – 0,1 мг азота.
Нагреватели, колбы, стеклянные холодильники – когда метод только открыли, все исполнялось исключительно в ручном режиме. Сегодня же все три этапа – разложение, дистилляция и титрование – могут быть легко выполнены с автоматических систем для анализа белка по Кьельдалю:
Минерализатора для разложения образца.
Дистиллятора для отгонки аммиака.
Скруббера для нейтрализации газов.
- продукт для анализа;
- гидроксид натрия (NaOH) 10%-ный;
- сульфат меди (CuSO4) 1%-ный;
- мерный стаканчик с делением в 1 мл или пробирка;
- вода;
- пипетка;
- прозрачная тара.
Объяснение:
1
Возьмите исследуемый продукт и измельчите путем разрезания и растирания до состояния кашицы. Например, яичный желток разотрите ложкой, а мясо измельчите в блендере. Если вы берете заведомо жидкий продукт питания, например, бульон, то первый шаг можете смело пропустить.Желток растираем ложкой
2
В заранее подготовленный мерный стаканчик помещаем полученную в первом шаге массу в объеме 0,5 мл и разводим водой до деления в 1 мл. Это и станет нашим исследуемым раствором. Если в первом пункте вы брали жидкий продукт питания (бульон, компот), то водой разводить его нет необходимости отмерьте 1 мл продукта мерным стаканчиком или пробиркой.Биуретовая реакция наглядно
Синупрет® –
Натуральное средство от насморка!
Устраняет заложенность носа
Обладает противовирусным действием
Предупреждает развитие осложнений!
Узнать больше...
SlickJump®
ИМЕЮТСЯ ПРОТИВОПОКАЗАНИЯ. НЕОБХОДИМО ПРОКОНСУЛЬТИРОВАТЬСЯ СО СПЕЦИАЛИСТОМ
3
Добавляем в отдельной прозрачной таре (пробирке) к 1 мл исследуемого раствора 1 мл 10 % раствора гидроксида натрия (NaOH). В домашних условиях отлично подойдет любое средство для прочистки труб, в его состав всегда входит необходимый нам компонент и стоит копейки. Будьте осторожны при работе с этим веществом: при попадании на кожу вызывает серьезные химические ожоги.К исследуемому продукту добавляем гидроксид натрия
4
Пипеткой добавляем к раствору 2-3 капли 1 % раствора сульфата меди (CuSO4). Приобрести его можно в хозяйственных магазинах, в супермаркетах отдел сад/огород, так как на практике медный купорос используют для борьбы с болезнями растений.Медный купорос
5
Перемешиваем содержимое прозрачной тары (пробирки). Внимательно следим за изменением окраски раствора. Если белок в биологическом продукте или лекарственном препарате - присутствует, то его пептидные связи образуют с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения, цвет которых мы и будем объяснять в следующем шаге.Перемешиваем содержимое путем взбалтывания
6
Интерпретируем изменение цвета исследуемого раствора. Если белки присутствуют – мы увидим фиолетовую окраску. В таком случае биуретовая реакция на качественное определение белка в продуктах питания будет считаться положительной. Однако, стоит обратить внимание и на оттенок жидкости, он должн стать красным либо синим.Биуретовая реакция положительна